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(a) MTT：

MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料。活细胞在琥珀酸脱氢酶和细胞色素c的作用下四唑环开裂，生成蓝色的甲月替结晶并沉积在细胞中，甲月替结晶的生成量仅仅与活细胞数目成正比（死细胞中的琥珀酸脱氢酶消失，不能还原MTT）。还原生成的甲月替结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺、20%的十二甲基磺酸钠（PH 4.7）或10%酸化十二甲基磺酸钠（PH 4.7）的溶液中溶解。利用酶标仪测定490nm波长处的光密度测出OD值，即反映活细胞数目。也可利用DMSO（二甲基亚砜）来溶解。用DMSO之前要尽量去掉培养液，一遍DMSO溶解甲月替颗粒，进行比色测定。

(b) CCK-8检测细胞增殖（活力）：

CCK-8（cell-counting kit-8）检测试剂盒是应用WST-8取代MTT被还原，WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。且WST-8相较XTT和MTS化学性状更稳定， 因此实验结果相对更加稳定。此外，WST-8相较MTT、XTT，线性范围相对宽，灵敏度更高。

当细胞增殖得越多越快，则formazan产生量越多，颜色越深；反之，当内外因造成的细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。应用酶标仪测定吸光值并进行统计学计算便可以获得细胞增殖（活性）相关数据。

(c) XTT：

化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色产物。当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的产物的吸光度与活细胞的数量成正比。用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）。代谢产物在OD450处有吸收峰。

1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。 缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。

应用范围

应用案例

用cck8的方法检测PDGF-D对细胞的毒性，本实验采用2个药物浓度，分别作用于细胞24小时、48小时、72小时，然后通过CCK8检测增殖情况，从而反映其药物对细胞的毒性。从表1以及柱状图中了解到药物浓度越大作用细胞时间越长，其细胞的增殖率越大，即药物对细胞的毒性越小。