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CRISPR/Cas9提高了基因编辑的准确性和特异性，使以前不可能开展的实验成为可能。它的效率是传统ZFN和TALEN系统的三到四倍。而且，只需导入几个不同的引导RNA，即可删除多个基因。该技术已广泛用于构建敲除细胞系，在这类细胞系中，靶标基因可以精确删除，从而完全去除其编码的蛋白质。根据不同细胞特点选择适宜的转染方法（病毒法，化学转染法或电转法）将gRNA序列和Cas9蛋白转入细胞中，并根据不同的转染方法进行不同时长的药筛。药筛完成后进行单克隆筛选，通过靶位点扩增及测序验证筛选出成功敲除的阳性克隆，最终交付纯合子细胞株与相关数据报告。

基因编辑细胞服务说明：

基因情况：单基因或者多基因敲除

细胞类型：贴壁细胞、悬浮细胞

服务承诺：提供单克隆细胞株

服务优势：

1. 速度：KO pool快至2周；KO单克隆纯合子，快至1.5月;

2. 敲除保证：sgRNA 3～6条，确保获得敲除株;

3. 多基因同敲：我司有两种成熟的多基因敲除实验体系，可同时/至少靶向3个基因靶点;

4. 团队专业    我司Cas9基因编辑团队目前已完成60余例细胞基因敲除案例，具备丰富的经验；

5. 种子优良    所有细胞种子均从中科院细胞库购买，代数低无污染；

6. 敲除无损    所有的敲除单克隆均通过多代次测序验证，确保敲除性状稳定不回复；

7. 质控严格    建系后连续3代细胞增殖活力评估。

基因敲除方案：
3499拉斯维加斯根据客户需求，结合靶基因的情况进行方案定制。通常情况下，对于每个基因，我们会设计3条sgRNA，靶向切割位置靠前的外显子区域，通过细胞自身的非同源修复机制，在切割位置产生碱基的突变、插入或部分DNA序列的删除，造成错义突变、无义突变、移码突变、片段缺失，进而影响下游RNA或蛋白的功能。

此外，3499拉斯维加斯CRISPR/Cas9研发团队推出pWST-KOS系列质粒，可同时介导多个基因靶点的切割，实现基因的大片段删除，或同时删除多个基因！

操作步骤：

交付内容：

1、经测序验证的目的基因敲除细胞株及对照细胞株各2支，每支细胞量不少于1*106 Cells。

2、详尽的实验报告：包括细胞株培养信息、实验步骤；sgRNA序列及测序峰图；单克隆筛选测序验证报告。

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