时间：2020-08-05 10:38:00 浏览：7043次
一、实验动物
选择SPF 级SD大鼠，6~8w龄，体重250-280 g，雄性。
二、实验步骤
1、动物适应性喂养
动物保持12h-12h昼夜交替，自由饮水、进食，温度23-25℃，适应性喂养一周后进入实验。
2、SD大鼠MCAO模型构建
参照Longa线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉（MCA），建立急性局部脑缺血再灌注模型。具体步骤为：大鼠称重，7%水合氯醛（0.5ml/100g）腹腔注射麻醉，颈前部备皮、消毒，然后将大鼠仰卧位放置于操作台上，钝性分离右侧皮下组织及肌肉暴露出颈总动脉，眼科镊小心分离伴行于颈总动脉的迷走神经及动脉周围粘膜组织。继续向头部分离，小心剔除覆盖于动脉上方的粘膜组织，可见颈外动脉、颈内动脉与颈总动脉呈“Y”字形分布，游离出独立的颈内、外动脉。颈外动脉远心端结扎（用烧烫的镊子熔断远心端便于插入栓线），近心端埋线以备结扎拴线，再用微动脉夹夹闭颈总动脉近心端和颈内动脉远心端，用显微外科剪将颈外动脉剪一小口，将栓线由颈外动脉切口处插入颈内动脉，用预先埋线结扎颈外动脉防止出血，松开微动脉夹，将栓线送入颅内，有明显的阻力感，表明栓线已插入MCA，局部脑缺血模型即告成功。医用棉签清理颈部血块，缝合皮肤，酒精棉球消毒，将大鼠放回笼子。
插线成功即为脑缺血开始，将栓线轻柔退致颈外动脉处，即为再灌注开始。术后动态观察大鼠的反应。麻醉后保温致动物苏醒，肛温36.5±0.5℃。
3、脑室给药
实验鼠头部备皮后固定于脑立体定位仪，头顶皮肤消毒，沿中线切开头皮，剥离筋膜，标记前囟，穿刺点位于矢状缝右旁1mm，冠状缝后1.5mm，进针深度1.5mm。高速颅骨钻于右侧脑室注射部位正上方钻穿颅骨，插入微量注射器，缓慢注入药液，注射完毕后留针数分钟，缓慢移出注射器，涂抹骨蜡，缝合外皮，完成脑定位注射。
4、建模后神经功能缺损评分以及TTC染色检测脑梗死灶分布
参照Zea Longa 5级神经功能缺损评分法对大鼠进行神经功能评分。0分：无神经功能缺损；1分：轻度局灶神经功能缺陷（不能完全伸展缺血对侧前肢）；2分：中度局灶神经功能缺陷（向缺血对侧转圈）；3分：重度局灶神经功能缺陷（向缺血对侧倾倒）；4分：不能自发行走，昏睡。
第一次评分：筛选神经功能评分在1-3分的大鼠纳入实验对象，剔除神经功能评分为0分和4分的大鼠。
第二次评分：于取材前进行评分记录各组间大鼠神经功能评分的差异。
5、WB 法检测相关蛋白指标表达
根据如下实验结果可见，与正常对照相比，A蛋白在模型组中表达增加，经过药物干预后表达降低。
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